Verübte 514 v. Chr. zusammen mit seinem Freund Aristogeiton in Athen einen Anschlag auf die Tyrannenbrüder Hippias und Hipparchos, dem jedoch nur Hipparchos zum Opfer fiel. Harmodios wurde bei dem Attentat selbst getötet. Der Tyrannenmord von Athen gilt als die Geburtsstunde der Demokratie